细胞能量代谢是细胞表型的重要驱动力，直接影响着细胞的命运与功能。在细胞的发育过程中，或在面对环境应激及治疗干预时，细胞可能会经历代谢重编程。因此，在研究癌症等重大疾病时，运用安捷伦Seahorse XF代谢分析技术，检测细胞的线粒体呼吸（OCR）和糖酵解（ECAR）等能量特征，显得尤为重要。这一技术有助于揭示细胞能量机制在驱动疾病表型中的作用。

在生物实验中，数据归一化（标准化）具有不可或缺的重要性。它不仅能够校正实验误差，提高数据可比性，还能优化分析过程，为后续的实验提供可靠基础。因此，在进行生物实验时，应充分重视数据归一化的步骤，并选择合适的方法，以确保实验数据的准确性与可靠性。尤其在开展Seahorse XF代谢分析时，细胞增殖速率、分化程度和黏附效率等多种因素都会影响上机检测时的细胞密度及生长均匀性，最终影响检测数据的准确性。因此，数据归一化成为Seahorse XF原始数据展示和后续分析中的关键环节，能够校正不同孔位中细胞数量的差异，从而确保获得准确可靠的实时细胞代谢测量值。

在细胞能量代谢检测中，有多种归一化方法可供选择，包括总蛋白归一化、基因组DNA均一化以及基于图像的细胞计数等。需要特别注意的是，在细胞能量代谢检测过程中，不推荐使用任何基于细胞代谢定量分析的细胞数量方法，例如MTT检测或ATP水平检测。为了帮助研究者在使用Seahorse XF进行活细胞能量代谢检测时快速有效地进行标准化，安捷伦针对贴壁细胞与悬浮细胞分别开发了两种最简单且直接的解决方案。

对于贴壁细胞，推荐采用基于成像的自动化细胞计数方法；对于悬浮细胞，建议使用基于流式细胞术的细胞计数方法。基于成像的能量代谢检测均一化工作流程利用安捷伦BioTek Cytation细胞成像多功能微孔板检测仪，提供了一套自动化的细胞计数流程，便于用户简便地开展XF数据归一化。通过优化原有Seahorse XF Protocol，加入Hoechst染料以减少手动注入带来的误差，并利用BioTek Cytation5及XF细胞成像和计数软件进行细胞计数，确保数据的标准化和准确性。

对于悬浮细胞体系，安捷伦NovoCyte流式细胞仪具备独特的绝对计数能力，可以为Seahorse XF检测提供严格的数据标准化操作。在细胞的标准化过程中，通过流式细胞术，显著降低了悬浮细胞培养中因细胞接种引起的总体变异性，从而提高了动态OCR测量的准确度，能够更精确地评估精氨酸预处理的T细胞在糖酵解与线粒体ATP生成之间的代谢转换。

安捷伦所开发并优化的Seahorse XF细胞能量代谢数据标准化流程，便捷高效地帮助研究者校正外部因素带来的误差，提高了细胞能量代谢数据的准确性和实验的重复性。此流程支持对代谢机制的深入理解，并促进疾病的诊断和治疗。因此，数据的高度可比性和可靠性也有利于开展大规模的数据分析。这两套方案适用于不同细胞体系，并经过多次验证，具备很高的准确性。

在生物医疗领域，借助金年会金字招牌诚信至上的理念，安捷伦致力于为研究者提供高质量的实验解决方案，推动科学研究的进步与发展。